薄層層析（TLC）是常用的一種分離和分析方法。
?
原理：利用吸附劑對(duì)樣品中各組分吸附能力不同，及展開劑對(duì)它們的解吸附能力的不同，使各組分達(dá)到分離的目的。
特點(diǎn)：微量、快速、簡單、節(jié)省。
?
分類：
吸附薄層層析（硅膠）
分配薄層層析（纖維素）
薄層離子交換層析（離子交換劑）
薄層凝膠層析（分子篩凝膠）
硅膠：表面帶有硅醇基（-Si-OH），呈弱酸性（pH=4.5），活性硅膠適合分離酸性或者中性化合物，如酚類、有機(jī)酸、甾體化合物以及氨基酸類，是基于吸附作用。非活性硅膠含有一定的水，在分離色素時(shí)是基于分配作用。
氧化鋁：弱堿性（pH=9）、酸性（pH=4）及中性（pH=7.5）三種氧化鋁。弱堿性氧化鋁用來分離中性或堿性化合物；中性氧化鋁適用于酸性及對(duì)堿不穩(wěn)定的化合物的分離；酸性化合物可用酸性氧化鋁分離。
化學(xué)鍵合相（C18、C8等）
?
各種硅膠板的區(qū)別：
硅膠G：含有13%煅石膏（GYPSUM）粘合劑的硅膠。
硅膠H：不含粘合劑的硅膠。
硅膠HF254：不含粘合劑，含有一種無機(jī)熒光劑（如錳激活的硅酸鋅），在254nm波長紫外光下，呈強(qiáng)烈黃綠色熒光。
硅膠GF254：含有煅石膏粘合劑，含熒光劑，在254nm波長紫外光下，呈強(qiáng)烈黃綠色熒光。
硅膠HF254+366：不含粘合劑，在254nm與366nm波長有熒光。
硅膠PF254：制備型，在254nm有熒光（有熒光劑，適用于不發(fā)光不易顯色物質(zhì)的制備與分離）。
?
?
幾種硅膠板標(biāo)注方法：
?
原點(diǎn)間距0.8~1mm，底邊距離0.5~0.8cm即可。
?
反應(yīng)液的取樣：
一般極性溶劑體系 | 強(qiáng)極性溶劑體系 | 需要淬滅的體系 | 強(qiáng)堿、酸性物質(zhì) |
可以直接取樣，也可以稀釋后取樣。 | 最好簡單后處理（加水和有機(jī)溶劑萃取）以后取樣。 | 處理（如加水或酸和有機(jī)溶劑）后取樣 | 最好中和后取樣 |
Note：1. 產(chǎn)品在水相或有機(jī)相
????? 2. 有無沒有溶解的固體
?
點(diǎn)樣：
手動(dòng)點(diǎn)樣：靈活方便，常用于各種TLC鑒別中。
自動(dòng)點(diǎn)樣：重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性好，常用于薄層掃描法的含量測定。
點(diǎn)樣量：原點(diǎn)位置的負(fù)荷有限，體積0.5~10ul，濃度通常為0.5~2mg。直徑3mm以內(nèi)。
樣品溶劑：原則上應(yīng)選擇對(duì)樣品可以溶解，但溶解度不是很大的溶劑。
?
Note：1. 點(diǎn)樣的濃度要控制適當(dāng)。
????? 2. 點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開的TLC分離度好。
????? 3. 0.3mm毛細(xì)點(diǎn)有機(jī)相，0.5mm點(diǎn)水較方便。
?
點(diǎn)樣常見問題：
1.?????? 點(diǎn)樣量太大。展開劑不能全部負(fù)載。
2.?????? 太濃了。展開劑從原點(diǎn)外圍繞行。
3.?????? 濃。未分開。
4.?????? 樣品溶劑殘留。吹干時(shí)應(yīng)注意高溫破壞樣品。
5.?????? 點(diǎn)樣量太少?？床磺宄?/p>
6.????? 樣品溶劑中溶解度很大。原點(diǎn)將變成空心圓。
?
?展開劑的選擇原則：
1.?????? 對(duì)所需成分有良好的溶解性。
2.??????可使各成分間有較好的分離。
3.?????? 待測組分的Rf在0.2~0.8之間。
4.?????? 不與待測組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
5.?????? 沸點(diǎn)適中，粘度較小。
6.?????? 展開后組分斑點(diǎn)圓且集中。
7.?????? 混合溶劑最好新鮮配置。
?
常用展開劑極性大小順序：
石油醚＜二氯甲烷＜乙醚＜四氫呋喃＜乙酸乙酯＜丙酮＜正丙醇＜甲醇＜水
展開劑體系的選擇原則：
※? 一般極性的化合物：PE/EA體系
※? 極性較大的化合物：DCM/CH3OH體系
?
※? 脂肪類胺化合物：在展開劑中加入0.1%（約為1滴）的氨水或三乙胺
※? 有羧基官能團(tuán)存在的化合物：在展開劑中加入微量的醋酸（乙酸或甲酸的使用，一方面增大展開劑極性，另外也可以抑制硅膠上羥基的作用，減少拖尾）
另外常用的混合體系：
PE/DCM，PE/Acetone，Ether/DCM，EA/DCM，EA/CH3OH
?
展開方法：
展開方法有單向、單向長板、多次多種極性展開、雙向展開等。
顯色：
一看：首先在日光下觀察，劃出有色物質(zhì)的斑點(diǎn)位置
二照：在紫外燈下觀察有無暗斑或熒光斑點(diǎn)
三碘：大部分有機(jī)物會(huì)吸附碘可逆的產(chǎn)生棕色或黃色斑點(diǎn)
四顯：既無色又無紫外吸收得物質(zhì)，可以用顯色劑顯色
?
?
?各種顯色劑及其配置方法：
?
硫酸溶液 | 硫酸-水（1:1）溶液；硫酸-甲醇或乙醇（1:1）溶液；1.5mol/L硫酸溶液與0.5-1.5mol/L硫酸銨溶液 | 大部分化合物 |
高錳酸鉀 | 1.5g KMnO4+10g K2CO3+1.25ml 10%NaOH | 含還原性基團(tuán)化合物，比如羥基，氨基，醛 |
磷鉬酸（PMA） | 乙醇5%磷鉬酸乙醇溶液，噴后120℃ （可用加熱槍）緩慢烘烤 | 還原性化合物顯藍(lán)色，再用氨氣熏，則背景變?yōu)闊o色 |
茚三酮 | 0.2g溶于乙醇100ml中。方法：噴后于110℃加熱。醋酸呈紅紫色斑點(diǎn) | 氨基酸 |
氯化鐵 | 1% FeCl3+50%乙醇水溶液 | 氯化鐵 |
硫酸鈰 | 10%硫酸鈰（IV）+15%硫酸的水溶液 | 生物堿 |
?
展開判斷：
※? 一般以目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值在0.4~0.6左右為佳。
※? 一般選用展開劑極性應(yīng)從低到高原則
異常情況：
?
TLC用途：
?
?
1.?????? 監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程
?
?
2.?????? 官能團(tuán)轉(zhuǎn)化與TLC極性大致表現(xiàn)的討論
?
3.?????? TLC和其他分析方法組合判斷
?
?
4.?????? 跟蹤萃取、重結(jié)晶等后處理的情況
?
5.?????? 摸索和確定柱層析時(shí)的洗脫條件的情況：
?
Note：1. Rf值在0.2左右的展開劑比例為沖洗劑的合適值。
?????? 2. 過柱時(shí)組分流出順序未必和TLC上點(diǎn)極性順序一致。
?
6.?????? 制備TLC
?
?
1）? 點(diǎn)板
Note：a. 溶劑：極性小，溶解性好
????? b. 上樣量：40-60mg
??? c. 上樣的位置：距離兩端大約1cm，距離底邊大約2cm。
2） 展開?
Note：a. 展開之前要將溶劑吹干
????? b. 所用展開劑的極性較展小板的時(shí)候大
3）? 顯色
?
4）? 疑似色帶的確定
?
5）? 刮板
?
Note：刮板后，在沒有得到結(jié)論前，不能輕易丟掉薄板。
?
6）? 洗脫
?
Note：洗脫劑應(yīng)避免加入過多的甲醇，以免產(chǎn)物中混有大量的硅膠。
微信掃一掃“二維碼”，即可添加關(guān)注我們的微信號(hào)，了解更多慧德易活動(dòng)信息及產(chǎn)品信息！
北京慧德易科技有限責(zé)任公司
層析系統(tǒng)、制備液相、分析液相、實(shí)驗(yàn)儀器
層析填料、大孔樹脂、色譜柱子、項(xiàng)目服務(wù)
010-59812370/1/2/3
